大家好，我是小曜，我来为大家解答以上问题。分子克隆名词解释，分子克隆很多人还不知道，现在让我们一起来看看吧！

1、(1)DNA片段的制备：常用以下方法获得DNA片段：①用限制性核酸内切酶将高分子量DNA切成一定大小的DNA片段；②用物理方法(如超声波)取得DNA随机片段；③在已知蛋白质的氨基酸顺序情况下，用人工方法合成对应的基因片段；④从mRNA反转录产生cDNA。

2、 (2)载体DNA的选择： ①质粒：质粒是细菌染色体外遗传因子，DNA呈环状，大小为1-200千碱基对(kb)。

3、在细胞中以游离超螺旋状存在，很容易制备。

4、质粒DNA可通过转化引入寄主菌。

5、在细胞中有两种状态，一是“紧密型”；二是“松弛型”。

6、此外还应具有分子量小，易转化，有一至多个选择标记的特点。

7、质粒型载体一般只能携带10kb以下的DNA片段，适用于构建原核生物基因文库，cDNA库和次级克隆。

8、 ②噬菌体DNA：常用的λ噬菌体的DNA是双链，长约49kb，约含50个基因，其中50%的基因对噬菌体的生长和裂解寄主菌是必需的，分布在噬菌体DNA两端。

9、中间是非必需区，进行改造后组建一系列具有不同特点的载体分子。

10、λ载体系统最适用于构建真核生物基因文库和cDNA库。

11、 M13噬菌体是一种独特的载体系统，它只能侵袭具有F基因的大肠杆菌，但不裂解寄主菌。

12、M13DNA(RF)在寄主菌内是双链环状分子，象质粒一样自主制复，制备方法同质粒。

13、寄主菌可分泌含单链DNA的M13噬菌体，又能方便地制备单链DNA，用于DNA顺序分析、定点突变和核酸杂交。

14、 ③拷斯(Cos)质粒：是一类带有噬菌体DNA粘性末端顺序的质粒DNA分子。

15、是噬菌体－质粒混合物。

16、此类载体分子容量大，可携带45kb的外源DNA片段。

17、也能象一般质粒一样携带小片段DNA，直接转化寄主菌。

18、这类载体常被用来构建高等生物基因文库。

19、 (3)DNA片段与载体连接：DNA分子与载体分子连接是克隆过程中的重要环节之一，方法有：①粘性末端连接，DNA片段两端的互补碱基顺序称之为粘性末端，用同一种限制性内切酶消化DNA可产生相同的粘性末端。

20、在连接酶的作用下可恢复原样，有些限制性内切酶虽然识别不同顺序，却能产生相同末端。

21、②平头末端连接，用物理方法制备的DNA往往是平头末端，有些酶也可产生平头末端。

22、平头DNA片段可在某些DNA连接酶作用下连接起来，但连接效率不如粘性末端高；③同聚寡核苷酸末端连接。

23、④人工接头分子连接，在平头DNA片段末端加上一段人工合成的、具有某一限制性内切酶识别位点的寡核苷酸片段，经限制性内切酶作用后就会产生粘性末端。

24、 连接反应需注意载体DNA与DNA片段的比率。

25、以λ或Cos质粒为载体时，形成线性多连体DNA分子，载体与DNA片段的比率高些为佳。

26、以质粒为载体时，形成环状分子，比率常为1∶1。

27、 (4)引入寄主细胞：常用两种方法：①转化或转染，方法是将重组质粒DNA或噬菌体DNA(M13)与氯化钙处理过的宿主细胞混合置于冰上，待DNA被吸收后铺在平板培养基上，再根据实验设计使用选择性培养基筛选重组子，通常重组分子的转化效率比非重组DNA低，原因是连接效率不高，有许多DNA分子无转化能力，而且重组后的DNA分子比原载体DNA分子大，转化困难。

28、②转导，病毒类侵染宿主菌的过程称为转导，一般转导的效率比转化高。

29、 (5)克隆的选择： ①直接筛选：有些载体带有可辨认的遗传标记，能有效地将重组分子与本底区分。

30、例如：有些λ噬菌体携带外源基因后形成的噬菌斑就会从原来的混浊变为清亮；还有些载体分子携带外源基因后，形成的菌落或噬菌斑的颜色有明显变化，如蓝色变为无色；有些λ噬菌体能侵染甲菌而不能侵染乙菌，携带外源DNA片段后便能侵染乙菌，因此乙菌释放的噬菌体均为重组分子。

31、 ②间接筛选：有引起载体分子带有一个或多个抗药性标记基因，当外源DNA插入到抗药基因区后，基因失活，抗性消失。

32、如一质粒有A和B两个抗药性基因，当外源基因插入到B基因区后，便只抗A药而不抗B药。

33、因此能在A药培养基上正常生长而不能在B药培养上生长的便是重组分子。

34、 ③核酸杂交：广泛用于筛选含有特异DNA顺序的克隆。

35、方法是将菌落或噬菌斑“印迹”到硝酸纤维膜等支持物上，变性后固定在原位，然后与标记的核酸探针进行杂交。

36、阳性点的位置就是所需要的克隆。

37、 ④免疫学方法：如果重组克隆能在宿主菌中表达，就可以用特异的蛋白质抗体为探针，进行原位杂交，选择特异的克隆。

本文到此讲解完毕了，希望对大家有帮助。